ABSTRACT In order to provide additional data on the prevalence and genetic diversity of Dientamoeba fragilis in human populations, we conducted a study in children from low-income communities in Sao Paulo State, Brazil. Fecal samples from daycare center attendees up to 6 years old (n=156) and staff members (n=18) were submitted to PCR and sequencing of D. fragilis as well as to microscopic examination for the presence of other intestinal parasites. All children assessed were asymptomatic and 10.3% (16/156) were positive for D. fragilis. No worker was found to be positive. An association between Dientamoeba and coinfection with other intestinal parasites was observed. Concerning the genetic diversity, 14 and only two isolates were genotype 1 and genotype 2, respectively. Our findings outline interesting aspects: (1) asymptomatic children as carriers of Dientamoeba in communities in which environmental conditions ensure parasite transmission and, (2) association between Dientamoeba infection in young children and coinfection with other enteric parasites, reinforcing its transmission via the fecal–oral route.

ABSTRACT Giardia duodenalis is one of the most important and widespread gastrointestinal parasites in the world. Despite its relevance as a causative agent of diarrhea, asymptomatic giardiasis occurs frequently, especially in low resources settings in which children are exposed to many risk factors. Based on microscopic examination and the polymerase chain reaction (PCR) amplification and sequencing of beta-giardin (bg), triose phosphate isomerase (tpi) and glutamate dehydrogenase (gdh) genes, we assessed G. duodenalis occurrence and genetic diversity in isolates of children attending a daycare center and living in low income families, in an economically successful region. Considering both, microscopic examination and PCR/sequencing methods, the overall prevalence of Giardia infection was 51.4%, with the highest frequency in children aged 1-4 years old (p<0.05). Genotyping of 50 isolates revealed that the assemblage A was found in 60% of the samples (30/50), followed by the assemblage B in 38% (19/50) and 2% of mixed-assemblage infections (1/50). At the sub-assemblage level, isolates genotyped as A were AII and among isolates B, BIII and BIV were identified. Both assemblages A and B were detected in children of all age groups, however assemblage A was more prevalent. The detection of anthroponotic assemblages and sub-assemblages (AII, BIII and BIV) reinforces human-to-human transmission, mainly in children of all age groups when they have not yet received toilet training, making them more vulnerable to infection.

Resumo: Os perfis protéicos e a atividade proteolítica dos produtos de excreção/secreção (PE/S) das larvas de primeiro (L1), segundo (L2) e terceiro (L3) estágios de Cochliomyia hominivorax foram estudados em laboratório. Os perfis protéicos foram obtidos por eletroforese em géis de poliacrilamida (SDS-PAGE). Os PE/S de cada fase larval (L1, L2 e L3), tratados com inibidores de proteases, contendo 30μg, 40μg e 50μg de proteína, foram aplicados em géis de poliacrilamida a 10%. A atividade proteolítica dos PE/S na sua forma nativa, foi analisada em géis co-polimerizados com gelatina e por testes colorimétricos usando a azocaseína como substrato, com a caracterização das proteases feita por meio de inibidores sintéticos. Diferentes perfis protéicos foram observados para os instares larvais, com L1 apresentando o perfil mais complexo. Apesar disso, foram observadas várias bandas protéicas comuns a todos os estágios larvais. Os PE/S de todos os instares mostraram atividade proteolítica sobre a gelatina, evidenciada por zonas de proteólise, com predominância de massas moleculares aparentes mais altas em L1, enquanto que para L2 e L3 as zonas de proteólise puderam ser observadas também em regiões de menores massas. Os testes com inibidores de proteases usando a gelatina como substrato mostraram que os PE/S de L1, L2 e L3 eram compostos principalmente de serina-proteases. Adicionalmente, inibição foi observada nos PE/S de L2 tratada previamente com EDTA, um inibidor de metalo-proteases. Os ensaios com a zocaseína revelaram um aumento gradual da atividade proteolítica sobre este substrato com o progresso do desenvolvimento larval, com a mais forte inibição sendo observada após o tratamento com 3,4 dicloroisocumarina (DCI) para os PE/S de L1, L2 e L3. Estes resultados sugerem que as larvas de C. hominivorax produzem diferentes proteases, fato que pode estar relacionado a processos vitais para a sobrevivência do parasita, tais como a penetração nos tecidos dos hospedeiros e nutrição durante os estágios larvais.

Abstract: The protein profiles and proteolytic activity of the excretory secretory products (E/SP) of the first (L1), second (L2) and third (L3) larval stages of Cochliomyia hominivorax were studied in the laboratory. Analysis on the E/SP protein profile was carried out using polyacrylamide gel containing sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE). The E/SP of each larval stage (L1, L2 and L3) treated with protease inhibitors, containing 30μg, 40μg and 50μg of protein, was applied to the 10% polyacrylamide gel. The proteolytic activity of the crude E/SP was analyzed in gels copolymerized with gelatin and by colorimetric assays using azocasein as a substrate, with the characterization of the proteases using synthetic inhibitors. Different protein profiles were observed for the larval instars, with L1 presenting the most complex profile. Nevertheless, various protein bands were observed that were common to all the larval instars. The E/SP of all the instars showed proteolytic activity on gelatin, evidenced by proteolysis zones, predominantly with apparently higher molecular masses in L1, while for L2 and L3 the proteolysis zones could also be observed in regions with lower masses. Tests with protease inhibitors using gelatin as substrate showed that the E/SP of larvae were mainly composed of serine proteases. Additionally, inhibition was observed in L2 E/SP treated previously with EDTA, an inhibitor of metalloproteases. The assays with azocasein revealed a gradual increase of proteolytic activity on this substrate with larval development progress, with the strongest inhibitions being observed after treatments with 3,4-dichloroisocoumarin (DCI) for E/SP of L1, L2 and L3. These results suggest that C. hominivorax larvae produce different proteases, a fact that can be related to the parasite's vital processes for survival, such as penetration into the host's tissues and nutrition during the larval stage.

Os efeitos da administração de Bifidobacterium animalis viáveis sobre a infecção por Strongyloides venezuelensis foram avaliados em camundongos experimentalmente infectados. Os parâmetros analisados incluíram a carga parasitária, o comprimento dos vermes, a quantidade de ovos eliminados e a histologia da mucosa intestinal. A administração oral da cepa 04450B de B. animalis, iniciada 14 dias antes da inoculação de larvas do nematódeo, foi acompanhada de uma redução significativa do número de vermes que se estabeleceu no intestino e do número de ovos eliminados nas fezes. Nos animais tratados com o probiótico, o percentual de redução de vermes adultos no intestino foi de 33% e da produção de ovos foi de 21%, em comparação com os do grupo controle. O comprimento das vilosidades do duodeno e a relação vilus/cripta foram significativamente maiores nos animais tratados, indicando que nestes animais as lesões intestinais foram mais leves. Os resultados do presente trabalho revelaram que a administração de B. animalis com o propósito de modular a resposta do hospedeiro contra infecções por nematódeos é uma possibilidade biologicamente plausível com impacto potencial em saúde pública. No entanto, são ainda necessários mais estudos para esclarecer os mecanismos de ação destes microrganismos e identificar os fatores envolvidos na produção dos efeitos benéficos.

The administration of viable Bifidobacterium animaliswas tested to induce resistance against Strongyloides venezuelensis infection in mice. Effects on parasite burden, worm length, egg output, and intestinal mucosal histology were evaluated. The oral administration of B. animalis, strain 04450B, starting 14 days before the inoculation of nematode larvae significantly decreased the worm burden and egg output. In probiotic treated animals, the percent reduction of adult worms in the intestine was of 33% and the reduction of egg production was of 21%, compared with those of the control group. The duodenum villous height and villous/crypt ratio were significantly higher in probiotic-treated mice, indicating that this group could be experiencing less intestinal damage. The present findings revealed that the administration of B. animalis for the amelioration of host response to nematode infections is biologically plausible and could have some potential for impacting public health. Meanwhile, further study is needed to delineate the nature and identity of the factor(s) involved in these beneficial effects.

As cisteína-proteases estão entre os alvos mais promissores para o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos, visto que participam de eventos fundamentais do ciclo de vida de muitos microorganismos, inclusive Giardia. Como a atividade das proteases pode ser controlada por inibidores específicos, essas substâncias têm sido avaliadas quanto ao potencial antiparasitário. Diante disso, o presente estudo teve por objetivo avaliar o efeito in vitro do inibidor de cisteína-proteases E-64 sobre o crescimento, a aderência e a viabilidade de trofozoítos de cepa de Giardia isolada em Botucatu. Nos ensaios de crescimento e aderência, o número de trofozoítos foi estimado microscopicamente em hemocitômetro, enquanto que a viabilidade celular foi avaliada pelo método do MTT. No presente estudo, embora o metronidazol tenha se apresentado bastante efetivo, o E-64 mostrou ser capaz de inibir o crescimento, a aderência e a viabilidade em taxas superiores a 50%, especialmente nos cultivos expostos à concentração de 100 µM. A despeito de preliminares, esses resultados demonstram que o inibidor E-64 pode interferir em processos primordiais para a sobrevivência do parasita, além do que, abrem novas perspectivas para investigações futuras a fim de se avaliar o real potencial giardicida dos inibidores de proteases.

The quest for new antiparasitic alternatives has led researchers to base their studies on insights into biology, host-parasite interactions and pathogenesis. In this context, proteases and their inhibitors are focused, respectively, as druggable targets and new therapy alternatives. Herein, we proposed to evaluate the in vitro effect of the cysteine protease inhibitor E-64 on Giardia trophozoites growth, adherence and viability. Trophozoites (105) were exposed to E-64 at different final concentrations, for 24, 48 and 72 h at 37 °C. In the growth and adherence assays, the number of trophozoites was estimated microscopically in a haemocytometer, whereas cell viability was evaluated by a dye-reduction assay using MTT. The E-64 inhibitor showed effect on growth, adherence and viability of trophozoites, however, its better performance was detected in the 100 µM-treated cultures. Although metronidazole was more effective, the E-64 was shown to be able to inhibit growth, adherence and viability rates by ≥ 50%. These results reveal that E-64 can interfere in some crucial processes to the parasite survival and they open perspectives for future investigations in order to confirm the real antigiardial potential of the protease inhibitors.

A pesquisa de infecções por Giardia e a caracterização genotípica deste protozoário foi realizada em primatas não humanos (PNH) mantidos em Zoológico a fim de avaliar o seu potencial zoonótico. As amostras dos animais consistiram de fezes colhidas do piso de 22 baias onde eram mantidos 47 primatas de 18 diferentes espécies. Exames coproparasitológicos foram realizados pelos métodos de concentração por sedimentação e centrífugo-flutuação e revelaram a presença dos seguintes parasitas e suas respectivas frequências: Giardia(18%); Entamoeba spp. (18%); Endolimax nana (4.5%); Iodamoeba spp. (4.5%); oxiurídeos (4.5%) e estrongilídeos (4.5%). O DNA extraído de todas as amostras fecais foi submetido à técnica de PCR para a amplificação dos genes gdh e tpi de Giardia, porém, só foram obtidos amplicons das quatro amostras positivas provenientes de Ateles belzebuth, Alouatta caraya, Alouatta fusca and Alouatta seniculus. O seqüenciamento dos fragmentos amplificados foi possível apenas para as amostras oriundas de Ateles belzebuth (BA1), Alouatta fusca (BA2) e Alouatta caraya (BA3), cuja análise fenética de ambos os genes revelou pertencerem ao genótipo A. As análises das sequências de tpi revelaram que todas as amostras pertencem ao subgenótipo AII. No que se refere ao gene gdhas análises revelaram uma amostra pertencente ao subgenótipo AII (BA3) e duas ao subgenótipo A1 (BA1 e BA2). Considerando o potencial zoonótico do genótipo A e o fato de que os animais não apresentavam sintomas de infecção, os dados do presente trabalho salientam a importância de se realizar, periodicamente, exames coproparasitológicos dos animais de zoológico, para implementação de medidas preventivas para resguardar a saúde dos animais em cativeiro, a de seus tratadores e dos visitantes de parques zoológicos.

Giardia infections in captive nonhuman primates (NHP) housed at a Brazilian zoo were investigated in order to address their zoonotic potential. Fresh fecal samples were collected from the floors of 22 enclosures where 47 primates of 18 different species were housed. The diagnosis of intestinal parasites after concentration by sedimentation and flotation methods revealed the following parasites and their frequencies: Giardia (18%); Entamoebaspp. (18%); Endolimax nana(4.5%); Iodamoeba spp. (4.5%); Oxyurid (4.5%) and Strongylid (4.5%). Genomic DNA extracted from all samples was processed by PCR methods in order to amplify fragments of gdh and tpi genes of Giardia. Amplicons were obtained from samples of Ateles belzebuth, Alouatta caraya, Alouatta fusca and Alouatta seniculus. Clear sequences were only obtained for the isolates from Ateles belzebuth (BA1), Alouatta fusca(BA2) and Alouatta caraya (BA3). According to the phenetic analyses of these sequences, all were classified as assemblage A. For the tpi gene, all three isolates were grouped into sub-assemblage AII (BA1, BA2 and BA3) whereas for the gdh gene, only BA3 was sub-assemblage AII, and the BA1 and BA2 were sub-assemblage AI. Considering the zoonotic potential of the assemblage A, and that the animals of the present study show no clinical signs of infection, the data obtained here stresses that regular coproparasitological surveys are necessary to implement preventive measures and safeguard the health of the captive animals, of their caretakers and of people visiting the zoological gardens.

O presente estudo consiste em uma caracterização preliminar da atividade proteolítica de frações de proteínas purificadas a partir de lisados de trofozoítos de cepa isolada e axenizada no Brasil. Frações obtidas por cromatografia líquida (FPLC) foram analisadas quanto ao perfil eletroforético em géis de poliacrilamida (SDS-PAGE) e a atividade proteolítica foi avaliada em géis contendo gelatina como substrato. A caracterização das enzimas foi realizada a partir da análise do efeito de inibidores sintéticos de cisteína-proteases (E-64, IAA), serina-proteases (PMSF), serina e cisteína-proteases (TPCK, TLCK, elastatinal), metalo-proteases (EDTA) e aspartil proteases (pepstatina) sobre a degradação do substrato. Entre 30 frações eluídas, bandas de proteínas foram observadas em oito delas, entretanto, atividade proteolítica foi detectada apenas nas frações 23, 24, 25 e 26. O perfil eletroforético das proteínas revelou poucas bandas distribuídas na faixa de 45 a 18 kDa. Os zimogramas revelaram zonas de proteólise na faixa de aproximadamente 62 a 35 kDa, entretanto destacaram-se as bandas de hidrólise de 62, 55, 53, 50, 46 e 40 kDa. Nos ensaios de inibição, a proteólise foi marcantemente inibida por E-64, TPCK, TLCK e elastatinal. Redução discreta da proteólise foi observada com IAA e PMSF, enquanto que EDTA e pepstatina não promoveram alteração dos perfis de hidrólise. Estas observações são relevantes, especialmente se considerarmos que para elucidar o envolvimento das proteases na relação parasita-hospedeiro, a purificação dessas moléculas é um requisito importante.

This report describes a preliminary characterization of proteolytic activity of proteins isolated from lysate of Giardia trophozoites of an axenic Brazilian strain. Fractions obtained by high-performance liquid chromatography (FPLC) were tested in SDS-polyacrylamide gel for the protein profiles, and the proteases activity was analyzed using gelatin impregnated SDS-PAGE. The proteases characterization was based on inhibition assays employing synthetic inhibitors for cysteine (E-64, IAA), serine (PMSF, TPCK, TLCK, and elastatinal), metalo (EDTA) and aspartic (pepstatin) proteases. Among thirty eluted fractions, polypeptide bands were observed in eight of them, however, proteolytic activity was detected in four ones (F23, F24, F25 and F26). Protein profiles of these fractions showed a banding pattern composed by few bands distributed in the migration region of 45 to < 18 kDa. The zymograms revealed proteolytic activity in all the four fractions assayed, mainly distributed in the migration region of 62 to 35 kDa. Among the profiles, the main pronounced zones of proteolysis were distinguished at 62, 55, 53, 50, 46 and 40 kDa. In inhibition assays, the protease activities were significantly inhibited by cysteine (E-64) and serine proteases (TPCK, TLCK and elastatinal) inhibitors. Gels incubated with other cysteine and serine protease inhibitors, IAA and PMSF, respectively, showed a decrease in the intensity of hydrolysis zones. Indeed, in the assays with the inhibitors EDTA for metalloproteases and pepstatin for aspartic proteases, none inhibition was detected against the substrate. These observations are relevants, especially if we consider that to define the real role of the proteases in host-parasite interaction, the purification of these enzymes for detailed studies may be warranted.

We have examined by gelatin-SDS-PAGE the protease activity in cell lysates of Giardia duodenalis trophozoites of two axenic strains isolated in Brazil from a symptomatic patient (BTU-11) and an asymptomatic carrier (BTU-10), and the reference strain Portland 1 (P1). The proteolysis band patterns showed differences among strains isolated from asymptomatic and symptomatic individuals. The lysate of the strain BTU-10, showed only five hydrolysis bands, while a greater number of bands (10-11 bands) was seen in strains BTU-11 and P1. The protease activity in all lysates was inhibited by cysteine (E-64 and iodoacetamide) and serine proteases (TPCK and TLCK) inhibitors, but not by PMSF and EDTA. In general, the results revealed protease activities in G. duodenalis trophozoites of Brazilian axenic strains and the predominance of cysteine proteinases. It should be stressed the inter-strain difference in hydrolysis band patterns observed between strains isolated from symptomatic patients and the strain obtained from an asymptomatic carrier.

Foi realizada a análise de algumas características bioquímicas e antigênicas de duas cepas axênicas de Giardia duodenalis, isoladas em Botucatu, a partir de cistos obtidos de paciente sintomático (BTU-11) e assintomático (BTU-10), tendo por referência a cepa padrão Portland 1 (P-1), isolada e axenizada nos Estados Unidos. Preparações contendo proteínas de membranas e proteínas solúveis (citosol) de cada cepa foram empregadas na eletroforese das proteínas em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), na análise de glicoproteínas pela técnica de Con A blot e na análise antigênica pela técnica de "Immunoblotting". Na análise do perfil eletroforético os padrões de bandas de proteínas das cepas BTU-10 e BTU-11 foram complexos e na maior parte homogêneos; algumas diferenças foram detectadas entre as proteínas de membranas. Várias glicoproteínas foram demonstradas, destacando-se as de 81, 72, 59 kDa e a glicoproteína de 62 kDa, detectadas nas preparações de proteínas de membranas e proteínas solúveis, respectivamente. Entre estas glicoproteínas, a de 81 kDa foi detectada apenas entre as proteínas de membranas das cepas BTU-11 e P-1, isoladas de casos sintomáticos. Vários componentes antigênicos foram reconhecidos por anticorpos IgG de coelho pela técnica de "Immunoblotting". Entre estes componentes, as proteínas de 32 kDa, entre as proteínas de membranas e a de 30 kDa, entre as proteínas solúveis, parecem tratar-se de proteínas já caracterizadas como "giardinas". O presente trabalho possibilitou detectar glicoproteínas, proteínas e antígenos em trofozoítos de duas cepas autóctones de G. duodenalis. De modo geral, as análises dos perfis eletroforético e glicoproteico e do "immunoblotting" demonstraram similaridade entre as cepas.

In the present study, we have analyzed by sodium docecyl sulphate - polyacrilamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), immunoblotting and Concanavalin A blotting (Con A blotting) proteins of membrane fractions and soluble fractions obtained from Giardia duodenalis trophozoites of two axenic strains isolated in Brazil from a symptomatic (BTU-11) and an asymptomatic patient (BTU-10), as compared to the reference strain Portland 1. Both Brazilian strains showed a complex and homogeneous electrophoretic pattern of proteins, but some differences could be observed. Several glycoproteins were detected, particularly the proteins of 81, 72, 59 kDa and the protein of 62 kDa in the membrane proteins and cytosol, respectively. Many antigenic components were revealed by anti-Giardia rabbit IgG antibodies in the immunoblotting analysis. Among these components, the membrane protein of 32 kDa and the cytosol protein of 30 kDa could be related to giardin, as previously demonstrated.

OBJETIVOS: Detectar anticorpos séricos anti-Giardia lamblia entre crianças atendidas em creches e estimar a freqüência de infecção por Giardia lamblia em área endêmica. MÉTODOS: Foram coletadas três amostras de fezes de cada uma das 147 crianças de três creches da rede municipal de Botucatu, SP, com idade variando de 0 a 6 anos, e as amostras foram processadas pelos métodos de sedimentação espontânea e flutuação pelo sulfato de zinco. Amostras de sangue foram obtidas da polpa digital, coletadas em papel de filtro e testadas pelos métodos de imunofluorescência indireta (IFI) e de reação imunoenzimática (Elisa) para pesquisa de IgG anti-Giardia. RESULTADOS E CONCLUSÕES: De um total de 147 crianças, 93 (63,3%) apresentaram cistos de Giardia nas fezes. Dos 147 eluatos testados, 93 (63,3%) e 100 (68%) foram positivos para Giardia em IFI e em Elisa, respectivamente. A sensibilidade de IFI foi de 82% e de Elisa, 72%. Contudo, Elisa foi menos específica (39%) do que IFI (70%). A imunofluorescência indireta apresentou maior concordância com o exame de fezes do que Elisa.

OBJETIVES: To detect anti-Giardia lamblia serum antibodies in healthy children attending public day care centers and to assess serological tests as tools for estimating the prevalence of G. lamblia in endemic areas. METHODS: Three separate stool specimens and filter paper blood samples were collected from 147 children ranging from 0 to 6 years old. Each stool sample was processed using spontaneous sedimentation and zinc sulfate flotation methods. Blood samples were tested by indirect immunofluorescence (IIF) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for Giardia IgG. RESULTS AND CONCLUSIONS: Of 147 individuals tested, 93 (63.3%) showed Giardia cysts in their feces. Using IIF and ELISA, serum antibodies were detected in 93 (63.3%) and 100 (68%) samples , respectively. Sensitivity of IIF and ELISA was 82% and 72%, respectively. However, ELISA revealed to be less specific (39%) than IIF (70%). IIF also showed a higher concordance with microscopic examination than ELISA.

OBJETIVOS: Detectar anticorpos séricos anti-Giardia lamblia entre crianças atendidas em creches e estimar a freqüência de infecção por Giardia lamblia em área endêmica. MÉTODOS: Foram coletadas três amostras de fezes de cada uma das 147 crianças de três creches da rede municipal de Botucatu, SP, com idade variando de 0 a 6 anos, e as amostras foram processadas pelos métodos de sedimentação espontânea e flutuação pelo sulfato de zinco. Amostras de sangue foram obtidas da polpa digital, coletadas em papel de filtro e testadas pelos métodos de imunofluorescência indireta (IFI) e de reação imunoenzimática (Elisa) para pesquisa de IgG anti-Giardia. RESULTADOS E CONCLUSÕES: De um total de 147 crianças, 93 (63,3%) apresentaram cistos de Giardia nas fezes. Dos 147 eluatos testados, 93 (63,3%) e 100 (68%) foram positivos para Giardia em IFI e em Elisa, respectivamente. A sensibilidade de IFI foi de 82% e de Elisa, 72%. Contudo, Elisa foi menos específica (39%) do que IFI (70%). A imunofluorescência indireta apresentou maior concordância com o exame de fezes do que Elisa.

OBJETIVES: To detect anti-Giardia lamblia serum antibodies in healthy children attending public day care centers and to assess serological tests as tools for estimating the prevalence of G. lamblia in endemic areas. METHODS: Three separate stool specimens and filter paper blood samples were collected from 147 children ranging from 0 to 6 years old. Each stool sample was processed using spontaneous sedimentation and zinc sulfate flotation methods. Blood samples were tested by indirect immunofluorescence (IIF) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for Giardia IgG. RESULTS AND CONCLUSIONS: Of 147 individuals tested, 93 (63.3%) showed Giardia cysts in their feces. Using IIF and ELISA, serum antibodies were detected in 93 (63.3%) and 100 (68%) samples , respectively. Sensitivity of IIF and ELISA was 82% and 72%, respectively. However, ELISA revealed to be less specific (39%) than IIF (70%). IIF also showed a higher concordance with microscopic examination than ELISA.

Foi realizado um levantamento parasitológico em três creches da rede municipal: duas na área urbana, uma no centro da cidade e a outra na periferia, e a terceira na zona rural. Três amostras de fezes, coletadas com intervalo de 7 dias, foram obtidas de 147 crianças com idade variando de 0 a 6 anos e de 20 funcionários. Cada amostra foi processada pelos métodos de sedimentação espontânea e centrífugo - flutuação com sulfato de zinco. Os resultados demonstraram que das 147 crianças examinadas, 93 (63,3%) apresentaram cistos de G. lamblia nas fezes. Apenas 1 funcionário foi positivo para G. lamblia. O uso de 3 amostras de fezes aumentou a positividade do exame para o diagnóstico deste parasita, uma vez que dos 93 casos positivos, 24 (25,5%) e 8 (8,5%) foram diagnosticados somente após exame da segunda e terceira amostras, respectivamente. Outros parasitas e comensais intestinais como Ascaris lumbricoides (20,4%), Trichuris trichiura (19,0%), Hymenolepis nana (8,8%), Entamoeba coli (22,4%) e Blastocystis hominis (32,0%) foram diagnosticados. A análise estatística revelou não haver associação entre localização das creches, sexo e a frequência de infecção por G. lamblia. As porcentagens mais altas de infecção por Giardia foram observadas entre as crianças com idade variando de 1 a 4 anos.

Considering that the number of day-care centers for pre-school-age children has expanded rapidly in developing countries, and that these institutions presenting conditions that facilitate the transmission of many enteric agents, a parasitological survey was carried out in three municipal day-cares from Botucatu: two in the urban area (one in downtown area and the other one in the city periphery area) and the third in the rural area. Three separate stool specimens were collected from 147 children ranging from 0 to 72 months old and 20 staff members. Each stool specimen was processed by Lutz and zinc sulfate flotation methods. The frequency of giardiasis observed among children of downtown, periphery and rural day-cares was 69.6%, 52.7% and 69.6%, respectively. Only one employee was positive for G. lamblia. The examination of three stool specimens increased the positivity for G. lamblia: from the ninety three final positive examinations, 24 (25.5%) and 8 (8.5%) were positives only after examination of the second and third samples, respectively. Others intestinal organisms like Ascaris lumbricoides (20.4%), Trichuris trichiura (19.0%). Hymenolepis nana (8.8%), Entamoeba coli (22.4%) and Blastocystis hominis (32.0%) were frequently found in the children. There was no significant association among localization of the day-cares, sex of the children and the levels of G. lamblia infection. According to the age, G. lamblia was found mainly in children between 12 to 47 months old.

Foi desenvolvido um teste de ELISA de Captura usando anticorpos policlonais purificados obtidos em coelhos contra três diferentes cepas axênicas de Entamoeba histolytica (ICB-CSP and ICB-462 do Brasil e HM1 do México) para detecção de coproantígenos em amostras de fezes de indivíduos: a) sintomáticos, b) assintomáticos, c) com outros parasitos intestinais, e d) sadios. Imunoglobulina G (IgG) contra E. histolytica foi isolada de imune soro de coelho, em duas etapas: cromatografia de afinidade em uma coluna contendo antígenos de E. histolytica unidos à Sepharose 4B, seguido por outra cromatografía em Sepharose 4B Proteína A. O teste de ELISA usando anticorpos purificados, foi capaz de detectar até um só trofozoíto por lâmina ou 70 ng de proteína de ameba por orifício, apresentando uma sensibilidade de 93% e uma especificidade de 94%. A combinação do exame microscópico com o método de ELISA de Captura teve uma concordância e discordância de 93,25% e 6,75%, respectivamente. Pode-se concluir que o teste de ELISA de Captura utilizando anticorpo purificado é altamente específico para a detecção de coproantígenos de E. histolytica em fezes de pacientes infectados, rápido, fácil e mais sensível que o exame microscópico.

A sensitive and specific Capture Sandwich ELISA (CSE) was developed using polyclonal purified rabbit antibodies against three different axenic strains of Entamoeba histolytica: CSP from Brazil and HM1 - IMSS from Mexico, for the detection of coproantigens in fecal samples. Immunoglobulin G (IgG) againstis E. histolytica was isolated from rabbits immunized with throphozoites whole extract in two stages: affinity chromatography in a column containing E. histolytica antigens bound to Sepharose 4B was followed by another chromatography in Sepharose antibodies 4B-Protein A. A Capture Sandwich ELISA using purified antibodies was able to detect 70ng of amebae protein, showing a sensitivity of 93% and specificity of 94%. The combination of microscopic examination and CSE gave a concordance and discordance of 93.25% and 6.75%, respectively. It was concluded that CSE is highly specific for the detection of coproantigens of E. histolytica in feces of infected patients, is quicker to perform, easier and more sensitive than microscopic examination.

To study the frequency of Blastocystis hominis among healthy individuals, feces were collected from 153 children and 20 staff members of some municipal day-care centers. Three separate stool specimens of each individual were processed by Lutz and Faust methods. From 173 studied individuals, 60 (34.7%) showed B. hominis, frequently in association with other intestinal parasites and/or commensals. B. hominis was found mainly in adults and children between 36 and 72 months old. All positive cases were detected only by Lutz method and the use of three stool specimens increased the positivity of the parasitological diagnostic.

Amostras de soros foram obtidas de 154 indivíduos comprovadamente parasitados pela Entamoeba histolytica (78 sintomáticos c 76 assintomáticos). Doze apresentavam trofozoitas nas fezes, enquanto 142 tinham apenas cistos. Os soros foram utilizados para testar a ocorrência de anticorpos anti-Entamoeba histolytica, empregando-se para tal, Reação de Hemaglutinação Indireta (HAI), Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), Reação de Fixação de Complemento (RFC) e Contraimunoeletroforese (CIEP). Entre os soros dos indivíduos com trofozoitas em suas fezes, 75,0% foram positivos para HAI e RIFI, 83,3% por RFC, e 41,7% por CIEP. Nos indivíduos que tinham apenas cistos, resultados positivos pelos mesmos testes foram respectivamente, 5,6%; 12,0%; 19,0% c 5,6%. A diferença cm relação aos títulos de anticorpos detectados através de HAI, RIFI, RFC e CIEP e em relação à presença de trofozoitas ou cistos nas fezes foi significativa para as quatro reações imunológicas, quando X² foi empregado (P < 0,05).

Serum samples were obtained from 154 individuals infected with Entamoeba histolytica (78 symptomatic and 76 asymptomatic). Twelve had trophozoites in the feces whereas 142 had only cysts. The sera were used to test the existence of antibodies anti-Entamoeba histolytica employing the Indirect Hemagglutination (IHA), Indirect Immunofluoresccnce (IFAT), Complement Fixation Reaction (CFR) and Counterimmunoelectrophoresis (CIEP). For those individuals with trophozoites in their feces, 75.0 were positive by IHA and IFAT, 83.0 by CFR and 41.7 by CIEP. In individuals who had only cysts, positive results by the same tests were respectively, 5.6%, 12.0%, 19.0% and 5.6%. The difference in relation to the tilers of antibodies detected through IHA, IFAT, CFR and CIEP and in relation to the presence of trophozoites or cysts in the feces was significative for four immunological reactions when X², was employed (P < 0.05).